חולים עם גרורות קרצינומה ממקור ראשוני לא ידוע [Carcinoma of Unknown Primary (CUP)] מעמידים בפני הרופא דילמה טיפולית. זיהוי רקמת הגידול הראשוני עשוי לסייע בגיבוש טיפול תרופתי ספציפי המותאם לסוג הגידול. בשני מחקרים שנערכו בדקו החוקרים את יישומה ויעילותה של בדיקת פרופיל ביטוי 48 מולקולות מיקרו-רנ"א (MicroRNA) מבוססת RT-PCR כמותי בניבוי סוג הגידול הראשוני במקרים כאלו. המחקרים הראו שבדיקה זו ניתנת ליישום, ונמצא כי תוצאת הבדיקה מנבאת בצורה מדוייקת את סוג הגידול הראשוני וכי פרופיל ביטוי זה נמצא בהתאמה עם ההתייצגות הקלינית של החולים ב-84% מהמקרים של גרורות קרצינומה ממקור ראשוני לא ידוע. לכן, במקרים של מחלה גרורתית ללא מקור ראשוני ידוע יכולה בדיקת פרופיל ביטוי מיקרו-רנ"א לשמש כתוספת יעילה חשובה להערכה הקלינית והפתולוגית המקובלת.

רקע
באחוז לא מבוטל מחולי הסרטן ההסתמנות הראשונה של המחלה היא גרורתית, עם גרורה אחת או יותר, דבר המצריך זיהוי של רקמת המקור הגידולי הראשוני. חולים עם קרצינומה ממקור ראשוני לא ידוע [Carcinoma of Unknown Primary (CUP)] מציגים תמונה קלינית של מחלה גרורתית בה לא ידוע מהו המקור הגידולי הראשוני של גרורות אלו גם אחרי בירור ההסטוריה הרפואית, בדיקה פיזיקאלית מקיפה, בדיקות הדמיה ובדיקות פתולוגיות של דגימות הגידול הקיימות. מקרים אלו מעמידים בפני הרופא דילמה טיפולית, וכמו כן עלול הטיפול בחולה להתעכב, ופעמים רבות מקבלים החולים טיפול אחיד קבוע לפי גישה של "טיפול אחד המתאים לכל". זיהוי ריקמת הגידול הראשוני עשוי לסייע בקביעת טיפול תרופתי ספציפי, דבר שיש לו השלכות לגבי השרדות החולה, וזאת בעיקר בעידן בו קיים פיתוח מתמיד של טיפולים ספציפיים, הן ציטוטוקסיים והן מכווני מטרה, המותאמים לסוגי סרטן ידועים.
פיתוחן ויישומן של שיטות אבחנה מולקולאריות לזיהוי הגידול הראשוני הפכו בשנים האחרונות לנושא בעל חשיבות אשר מעורר עניין רב בעולם המדע והרפואה. קיימות עדויות לכך ששימוש בשיטות אימונוהיסטוכימיות ובפרופילים מולקולאריים עשוי לסייע בזיהוי תת-קבוצות ייחודיות של גידולי CUP, שפרופיל הביטוי שלהם מתאים לנגעים גרורתיים מחולים עם ממאירויות מוגדרות.
מיקרו-רנ"א (MicroRNAs), מולקולות אוליגונוקלאוטידים של רנ"א באורך 23-21 נוקליאוטידים, מעורבות בבקרת ביטוי גנים ובעלות תפקיד חשוב בהתמיינות רקמות ובהתפתחות גידולים. הן מהוות גורם שמור באבולוציה ומציגות דפוסי ביטוי ספציפיים ביותר ברקמות השונות. דפוסי ביטוי ספציפיים אלו ברקמות ובגידולים המתפתחים בהן עשוי לאפשר זיהוי של רקמת הגידול הראשוני.

בניית השיטה לסיווג מקור הגידול הראשוני
במחקר ישראלי שפורסם בחודש מרץ השנה במהדורה האלקטרונית של העיתון Modern Pathology1 ע"י רוזנוולד וחבריו, מציגים החוקרים שיטה סטנדרטית לזיהוי רקמת מקור הגידול במקרים בהם היא אינה ידועה, ומוכיחים את יעילותה.
במחקר זה נעשה שימוש בנתוני microarray מ-504 דגימות גידול. על בסיס נתונים אלו נבחרה רשימה ראשונית של 104 מולקולות מיקרו-רנ"א כסמנים ביולוגיים אפשריים. כדי לזהות את פרופילי הביטוי של 104 מולקולות אלו, בוצעה בדיקת ביטוי שלהן באמצעות תגובת Reverse Transcriptase PCR כמותית [quantitative RT-PCR (qRT-PCR)] ב-356 דגימות גידול שעברו קיבוע בפורמלין ונשמרו בפרפין [Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded (FFPE)]. על בסיס בדיקה זו נבחרו 48 מתוך מולקולות המיקרו-רנ"א לשמש בבדיקת הסיווג לזיהוי מקור גידול ראשוני. הבדיקה בה עשו החוקרים שימוש מודדת רמות ביטוי של 48 מולקולות מיקרו-רנ"א אלו באמצעות qRT-PCR ומנבאת את רקמת הגידול הראשוני מתוך 25 סוגים אפשריים, המתאימים ל-17 רקמות מוצא או אברי מוצא שונים. האלגוריתם לסיווג רקמת המקור על-סמך בדיקת פרופיל ביטוי מיקרו-רנ"א מבוסס על שילוב "עץ-החלטה" בינארי יחד עם שיטה לבדיקת "השכנים הקרובים ביותר" [K-nearest neighbors (KNN) ]. שיטת KNN מבוססת על השוואת ביטוי כל 48 מולקולות המיקרו-רנ"א בכל אחת מהדגימות אל מול כל שאר הדגימות במאגר הנתונים. כל אחת משתי השיטות – העץ הבינארי ושיטת KNN – נותנת תוצאה אחת לגבי רקמת המקור הראשוני, וכאשר זה אפשרי גם את הסוג ההסטולוגי של הגידול. שיטת הסיווג המשולבת נותנת תוצאה המורכבת מתשובה בודדת כאשר שתי השיטות נתנו את אותה התוצאה או שתי אפשרויות של מקור גידול ראשוני כאשר שתי השיטות נתנו שתי תוצאות שונות.

בדיקת יעילות ודיוק השיטה לסיווג מקור הגידול הראשוני
בהמשך המחקר נבדקה שיטת הסיווג שפותחה על סידרה של 204 דגימות גידול שנשמרו בצורה דומה (FFPE), מתוכן קרוב ל-100 דגימות היו מגרורות. תוצאות שיטת הסיווג המשולבת חזו בצורה מדוייקת את מקור הרקמה ב-85% מהמקרים. יתר על כן, ב-66% מהמקרים הייתה התאמה בין שתי השיטות (העץ הבינארי ושיטת KNN) לגבי רקמת המקור, וכאשר הייתה התאמה כזו ב-90% מהמקרים האלו התוצאה הבודדת שהתקבלה הייתה נכונה.

במחקר נוסף שכלל שיתוף פעולה של מרכז אנדרסון לסרטן באוניברסיטה של טקסס, ארצות הברית, חברת Rosetta Genomics בפילדלפיה, ארצות הברית, וחברת Rosetta Genomics ברחובות, ישראל, השתמשו החוקרים בבדיקת סיווג זו המבוססת על ביטוי מולקולות מיקרו-רנ"א לצורך הערכה פרוספקטיבית של רקמה גידולית מחולים עם CUP. זאת במטרה לבדוק את יכולתה של בדיקה זו לחזות נכונה את רקמת המקור בחולים עם גרורות קרצינומה ממקור לא ידוע. במחקר נבדקו דגימות רקמה מ-89 חולים. ב-14 מהמקרים לא הכילו הדגימות כמות מספקת של תאי גידול לצורך הבדיקה, וב-13 דגימות נוספות איכות הרנ"א לא הייתה טובה מספיק לקבלת תוצאה. ב-62 הדגימות האחרות התאפשרה הבדיקה, ונבדק ביטויין של 48 מולקולות המיקרו-רנ"א. גם במקרה זה הייתה הבדיקה מבוססת על טכניקת qRT-PCR, ותוצאותיה נותחו על בסיס שילוב שיטות עץ ההחלטה הבינארי ושיטת KNN. תוצאות הבדיקה נבדקו באמצעות שימוש בכל המידע הקליני הקיים לגבי החולה, כולל הסטוריה רפואית, בדיקה פיזיקאלית, תוצאות בדיקות מעבדה מפורטות, תוצאות הדמיה ובדיקות פתולוגיות, ובדיקות פולשניות מוכוונות. ב-20 מהמקרים הניבה בדיקת המיקרו-רנ"א תוצאה עם מקור ראשוני אפשרי יחיד וב-42 המקרים האחרים הניבה הבדיקה שתי רקמות כמקור ראשוני אפשרי, ובמקרים אלו המקור הראשוני שהתאים יותר לנתונים הקליניים שנבדקו נבחר כתוצאת הבדיקה.
נמצא כי ב-44% מהמקרים הייתה התאמה מלאה (full concordance) בין תוצאת הבדיקה לבין ההתייצגות הקלינית, וב-40% נוספים מהמקרים התוצאה שהתקבלה בבדיקה הייתה אפשרית קלינית (clinically plausible).

לסיכום:
בדיקת ביטוי 48 מולקולות מיקרו-רנ"א מבוססת qRT-PCR היא בדיקה ישימה, ונמצא כי תוצאת הבדיקה מנבאת בצורה מדוייקת את סוג הגידול הראשוני ב-85% וכי פרופיל ביטוי זה נמצא בהתאמה עם ההתייצגות הקלינית של החולים ב-84% מהמקרים של גרורות קרצינומה ממקור ראשוני לא ידוע. תוצאות אלו מבססות את האפשרות לעשות שימוש בבדיקת פרופיל ביטוי מיקרו-רנ"א כתוספת יעילה להערכה הקלינית והפתולוגית המקובלת, בעיקר במקרים בהם הפרופיל האימונוהיסטוכימי אינו תורם לאבחנה.

References:

1. Rosenwald S., Gilad S., Benjamin S. et al. Validation of a microRNA-based qRT-PCR test for accurate identification of tumor tissue origin. Modern Pathology, published online 26 March 2010; doi:10.1038/modpathol.2010.57

2. G. R. Varadhachary et al. PROSPECTIVE GENE SIGNATURE STUDY USING microRNA TO PREDICT THE TISSUE OF ORIGIN (ToO) IN PATIENTS WITH CANCER OF THE UNKNOWN PRIMARY (CUP) ASCO 2010.

הירשמו לקבלת עדכונים בנושאים שעלו בכתבה